細(xì)胞培養(yǎng)步驟及注意事項(xiàng)
更新時(shí)間：2020-02-10
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細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
①準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K : GIBCO,貨號(hào)：21127-022);北美胎牛血清，10%; PS 1%。
②培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
③凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
2.細(xì)胞處理：
①復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。
②細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
①收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染， 請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
②所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作， 并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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