長(zhǎng)期以來(lái)，科學(xué)家多依賴(lài)永生化的細(xì)胞系來(lái)進(jìn)行各種研究，但在過(guò)去十年，隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域發(fā)生了巨大變化，新型的技術(shù)和培養(yǎng)試劑讓使用原代細(xì)胞作為研究對(duì)象成為可能。相比于細(xì)胞系，原代細(xì)胞更多保留了體內(nèi)原始組織的生物學(xué)特征，如生長(zhǎng)和衰老，因此通過(guò)原代細(xì)胞可建立更好的細(xì)胞疾病模型。

原代細(xì)胞（Primary cells）是指來(lái)源活體組織，經(jīng)過(guò)特定分離方法制備而成的初始細(xì)胞。

原代細(xì)胞離體時(shí)間短且不經(jīng)過(guò)永生化過(guò)程，其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保持原有的遺傳特征，可更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)，從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)，很適合用于藥物測(cè)試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。

01 原代細(xì)胞與細(xì)胞系該如何選？

原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以?xún)?nèi)統(tǒng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞系。

細(xì)胞系因其容易培養(yǎng)、種類(lèi)多、產(chǎn)量可觀的優(yōu)點(diǎn)一直是細(xì)胞水平研究，且價(jià)格相對(duì)低廉，但細(xì)胞系“價(jià)廉卻不一定物美”。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞系在連續(xù)培養(yǎng)的過(guò)程會(huì)不斷發(fā)生突變，長(zhǎng)時(shí)間的多次傳代可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞系的基因型和表型都發(fā)生變化，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如有研究報(bào)道，HEK293經(jīng)腺病毒轉(zhuǎn)染后得到的細(xì)胞更接近未成熟神經(jīng)元細(xì)胞；MDA-435作為乳腺癌細(xì)胞被廣泛用于各種研究，但近年來(lái)越來(lái)越多證據(jù)表明其可能為一種黑色素瘤細(xì)胞。

原代細(xì)胞則不存在這些問(wèn)題，雖然原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)的成本可能相對(duì)更高，但原代細(xì)胞作為更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型，可讓你的研究結(jié)論更加接近“事實(shí)”，且原代細(xì)胞的使用可減少動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需的成本開(kāi)支。另外在某些人體體內(nèi)無(wú)法進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，原代細(xì)胞因其高度保持了在體內(nèi)的生物學(xué)特性，可在一定程度解決這個(gè)問(wèn)題。

由于永生化的細(xì)胞系與體內(nèi)組織細(xì)胞的生物特性相差甚遠(yuǎn)，導(dǎo)致許多生理和病理的過(guò)程難以重復(fù)，近年來(lái)，原代細(xì)胞正逐步成為細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的工具，為疾病機(jī)制、藥物研發(fā)等提供了高質(zhì)量的模型。但不可能否認(rèn)的是，細(xì)胞系在科研中的地位仍十分重要，例如在標(biāo)準(zhǔn)化方案的確立上細(xì)胞系是良好的工具，某些需要大量細(xì)胞的研究如全基因組遺傳篩選，由于原代細(xì)胞數(shù)量有限且對(duì)培養(yǎng)條件要求苛刻，細(xì)胞系也是。

02 原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

原代細(xì)胞是出了名的難養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)操作的要求更苛刻。原代細(xì)胞在體外通常只能傳代少數(shù)幾次，某些原代細(xì)胞（如神經(jīng)元細(xì)胞）甚至無(wú)法進(jìn)行傳代。對(duì)于研究人員來(lái)說(shuō)，如何才能經(jīng)濟(jì)高效地培養(yǎng)好原代細(xì)胞，并圍繞這有限幾次傳代的細(xì)胞設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，是更大的一個(gè)挑戰(zhàn)。

原代細(xì)胞是取材于切除的動(dòng)物組織，通過(guò)酶處理，在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)直至達(dá)到足夠的數(shù)量。分離的原代細(xì)胞有兩種類(lèi)型：貼壁細(xì)胞（錨定依賴(lài)性生長(zhǎng)）和懸浮細(xì)胞（錨定非依賴(lài)性），貼壁細(xì)胞多來(lái)自器官組織，而懸浮細(xì)胞多來(lái)自血液系統(tǒng)的細(xì)胞。

從組織制備原代細(xì)胞，即使捱過(guò)了極其嚴(yán)苛的解離步驟，不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆蛛x操作可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、表型不一致甚至細(xì)胞污染，特別是由于組織中可能含有細(xì)菌等微生物，污染問(wèn)題對(duì)于原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)是一個(gè)很大的隱患。而為了讓研究人員不再為這些問(wèn)題頭疼，現(xiàn)在已經(jīng)出現(xiàn)了一些細(xì)胞公司可供應(yīng)現(xiàn)成的原代細(xì)胞，并對(duì)應(yīng)配有充分優(yōu)化的培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)方案，這使得原代細(xì)胞的培養(yǎng)和研究比以往要輕松得多。

而對(duì)于具備自主從組織中獲取原代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室，也建議以商業(yè)化的原代細(xì)胞作為對(duì)照，采用均一性和穩(wěn)定性更好的P2/P3代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并用專(zhuān)門(mén)的原代細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，大限度提高原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。