Qubit熒光計(jì)報(bào)價(jià)-Qubit熒光劑價(jià)格

    在下一代測(cè)序文庫(kù)制備、實(shí)時(shí)定量PCR模板構(gòu)建及蛋白質(zhì)功能研究等前沿實(shí)驗(yàn)中，樣品濃度的準(zhǔn)確定量是決定下游成敗的首要環(huán)節(jié)。面對(duì)珍貴且稀有的微量樣本，或存在于復(fù)雜污染物體系中的目標(biāo)分子，傳統(tǒng)的紫外吸光度法往往因缺乏選擇性而給出“虛高"讀數(shù)。Qubit熒光計(jì)作為新一代專(zhuān)用的臺(tái)式熒光檢測(cè)平臺(tái)，憑借其基于熒光染料特異性結(jié)合的檢測(cè)原理，可在游離核苷酸、蛋白質(zhì)或鹽類(lèi)共存的惡劣環(huán)境中精準(zhǔn)捕獲靶分子（DNA、RNA或蛋白質(zhì)）的真實(shí)濃度。儀器的單樣品檢測(cè)模式與低至1微升的樣品消耗設(shè)計(jì)，使其成為處理痕量或昂貴樣本的理想選擇。配合內(nèi)置的試劑計(jì)算器與多樣化的數(shù)據(jù)導(dǎo)出方式，Qubit熒光計(jì)（特別是當(dāng)前主流的Qubit4.0與Qubit3.0型號(hào)）從根本上解決了一直以來(lái)困擾傳統(tǒng)定量方法靈敏度不足與背景信號(hào)干擾的問(wèn)題，為等關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)提供更為可靠的質(zhì)控基石。

一、核心技術(shù)原理：熒光染料的選擇性“標(biāo)簽"與精準(zhǔn)校準(zhǔn)

    Qubit熒光計(jì)的Qubit3.0與Qubit4.0在檢測(cè)邏輯上遵循著經(jīng)典的熒光滴定路線(xiàn)，其基本的運(yùn)行原理是Qubit讀取系統(tǒng)對(duì)高熒光信號(hào)的采集與轉(zhuǎn)換方式。整個(gè)定量流程核心分為兩個(gè)部分：樣本工作液建立與軟件系統(tǒng)對(duì)標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)下的定量計(jì)算。

    Qubit熒光計(jì)的工作原理秉承并不斷深化創(chuàng)新，其核心奧秘在于配套的Invitrogen™Qubit®檢測(cè)試劑盒。每一套Qubit檢測(cè)體系都含有專(zhuān)為特定靶標(biāo)設(shè)計(jì)的MolecularProbes®熒光染料。這類(lèi)染料具備親和選擇性：它們只會(huì)在與特定生物分子結(jié)合時(shí)才會(huì)發(fā)射熒光信號(hào)。例如，QubitdsDNAHS檢測(cè)試劑盒里的熒光染料，能夠在存在等量RNA干擾的環(huán)境中，只與雙鏈DNA結(jié)合，排除假陽(yáng)性干擾。

    檢測(cè)開(kāi)始后，實(shí)驗(yàn)人員首先制備兩管即用型標(biāo)準(zhǔn)品溶液（試劑盒附帶標(biāo)準(zhǔn)品），連同待測(cè)樣品管一起放入Qubit熒光計(jì)。Qubit4.0基于熒光強(qiáng)度與靶分子濃度成正比的規(guī)律，通過(guò)高靈敏度光學(xué)元件檢測(cè)樣品與繪制已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品（Q1，Q2）對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)計(jì)算未知樣本濃度：即運(yùn)行中的“檢測(cè)未知待測(cè)樣本"環(huán)節(jié)，大幅提高了下游轉(zhuǎn)染或基因編輯實(shí)驗(yàn)的把握。這種檢測(cè)技術(shù)不受樣品中可能存在的其他雜質(zhì)分子影響，熒光強(qiáng)度與樣品中的靶分子濃度相對(duì)應(yīng)。Qubit熒光計(jì)可檢測(cè)Qubit檢測(cè)試劑盒中與樣本中靶分子高度特異性結(jié)合的熒光染料。這些染料只有與靶標(biāo)結(jié)合時(shí)才會(huì)發(fā)射熒光信號(hào)、即使靶分子濃度較低時(shí)亦是，因此可提供靈敏的讀數(shù)。Qubit技術(shù)只檢測(cè)靶分子(而不是污染物)的濃度，這種特異性可以獲得更精確的結(jié)果，DNA和RNA定量特異性和靈敏度均達(dá)到行業(yè)認(rèn)可水平。

二、核心檢測(cè)參數(shù)與靈敏度優(yōu)勢(shì)

    Qubit熒光計(jì)在定量靈敏度方面展現(xiàn)出了相比于傳統(tǒng)紫外分光光度法的顯著性能優(yōu)勢(shì)。Qubit4.0在檢測(cè)低濃度核酸時(shí)表現(xiàn)尤為突出，其檢測(cè)限可達(dá)10pg/μL的DNA或12.5μg/mL的蛋白質(zhì)。Qubit3.0同樣具備這一高靈敏度檢測(cè)能力，能夠準(zhǔn)確定量濃度僅為10pg/μL的DNA和12.5μg/mL的蛋白。這一靈敏度水平使Qubit熒光計(jì)在檢測(cè)微量樣本（如單細(xì)胞測(cè)序前的gDNA定量、cfDNA等）時(shí)相比傳統(tǒng)紫外吸收法（檢測(cè)下限2-5ng/μL）高出約2-3個(gè)數(shù)量級(jí)。

    在選擇性方面，Qubit熒光計(jì)的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)源于其靶向性熒光染料。傳統(tǒng)的紫外吸光法不具選擇性，測(cè)量260nm所有分子的吸光值——包含DNA、RNA、蛋白質(zhì)、游離核苷酸或多余的鹽離子，導(dǎo)致濃度高估。反觀Qubit熒光計(jì)，其分析試劑盒里的熒光染料只與樣品中的特異分子結(jié)合——DNA、RNA或蛋白，避免不準(zhǔn)確測(cè)量帶來(lái)的重復(fù)工作。Qubit熒光計(jì)能夠區(qū)分雙鏈DNA（dsDNA）、單鏈DNA（ssDNA）和RNA，甚至能夠評(píng)估RNA的完整性和質(zhì)量，這種高選擇性使Qubit在需要高特異性測(cè)量的實(shí)驗(yàn)中具有明顯優(yōu)勢(shì)。

    Qubit4.0還配備了雙核處理器，可在5秒內(nèi)快速準(zhǔn)確地計(jì)算出DNA、RNA或蛋白質(zhì)樣品的濃度。Qubit熒光計(jì)最多可存儲(chǔ)1000個(gè)樣品結(jié)果，實(shí)驗(yàn)人員可以通過(guò)U盤(pán)導(dǎo)出，也可以使用USB連接線(xiàn)直接與電腦相連。更進(jìn)一步的，帶WiFi功能的Qubit4還支持通過(guò)無(wú)線(xiàn)或云連接靈活地導(dǎo)出數(shù)據(jù)，以便輕松訪(fǎng)問(wèn)定量數(shù)據(jù)。部分采用專(zhuān)業(yè)軟件升級(jí)的儀器還可選配符合21CFRPart11規(guī)范的合規(guī)數(shù)據(jù)管理模塊，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室GLP/GMP環(huán)境的電子簽名與審計(jì)追蹤要求。

三、RNAIQ即時(shí)質(zhì)量評(píng)估：快速區(qū)分完整與降解RNA

    Qubit4.0的升級(jí)亮點(diǎn)聚焦于全新的RNAIQ(Integrity&Quality)檢測(cè)功能。該檢測(cè)使用兩種獨(dú)特的熒光染料：一種與大片段、完整性好或具有高級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA分子結(jié)合，另一種選擇性與小片段、降解的RNA進(jìn)行結(jié)合。通過(guò)兩種染料的結(jié)合使用，Qubit可在僅需1微升樣品的情況下，快速評(píng)估RNA樣品的質(zhì)量和完整性，檢測(cè)結(jié)果以RNAIQ數(shù)值形式呈現(xiàn)。

    與傳統(tǒng)基于微流體芯片法的檢測(cè)方法相比，QubitRNAIQ法所需的設(shè)備成本低，操作簡(jiǎn)單，更重要的是檢測(cè)所需的時(shí)間大大縮短。通常來(lái)說(shuō)，完成12個(gè)樣品的檢測(cè)，RNAIQ法約需要10分鐘，而使用微流體法，約需要75分鐘。對(duì)于只需要快速評(píng)估RNA樣品是否降解的日常質(zhì)控場(chǎng)景，Qubit4.0的RNAIQ功能可大幅提高樣品質(zhì)控環(huán)節(jié)的時(shí)間效率。

四、Qubit應(yīng)用場(chǎng)景與核心價(jià)值

    Qubit熒光計(jì)在多個(gè)關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景中發(fā)揮著核心的樣本質(zhì)控作用，尤其適用于以下幾種情況：

    樣品十分稀有且難以處理：僅需1微升樣品即可測(cè)量，避免珍貴樣品不必要的耗損

    提取后的核酸或蛋白質(zhì)量很少：在低濃度下亦具有高靈敏度和準(zhǔn)確性

    樣品將用于成本昂貴或周期較長(zhǎng)的下游實(shí)驗(yàn)：避免因定量不準(zhǔn)導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)失敗風(fēng)險(xiǎn)

    樣品制備過(guò)程復(fù)雜，需要特殊技術(shù)：如激光顯微切割（LCM）等

    NGS文庫(kù)定量的起始質(zhì)控基準(zhǔn)

    在現(xiàn)代NGS工作流程中，Qubit熒光計(jì)是文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程里定量工具。它對(duì)dsDNA的高度選擇性可有效排除反應(yīng)體系中游離引物、接頭二聚體等雜質(zhì)對(duì)定量結(jié)果的干擾，確保計(jì)算混合文庫(kù)池濃度時(shí)上機(jī)測(cè)序的準(zhǔn)確性與產(chǎn)出均一化。文獻(xiàn)數(shù)據(jù)顯示，在2013年發(fā)表的一篇PLoSOne研究中，Simbolo等人報(bào)道Qubit熒光定量是一種可靠且高性?xún)r(jià)比的方法，可用于鑒定各種NGSDNA制備物，包括冷凍組織和FFPE樣品中的DNA。在他們測(cè)試過(guò)的儀器中，數(shù)據(jù)顯示使用Qubit熒光計(jì)獲取的DNA定量結(jié)果有著較高的重現(xiàn)性，并與DNA定量分析的qPCR數(shù)據(jù)一致，即使是對(duì)FFPE樣品中部分降解的DNA來(lái)說(shuō)也是一樣。

    Qubit4.0相較于前代加入的高速雙核處理器提升了數(shù)據(jù)吞吐量與讀值穩(wěn)定性，使得該項(xiàng)定量過(guò)程幾分鐘內(nèi)即可結(jié)束，這為后續(xù)qPCR精確質(zhì)檢前提供了一個(gè)快捷、潔凈的且可溯源的出發(fā)點(diǎn)。

    蛋白質(zhì)分析與WesternBlot樣品預(yù)處理

    對(duì)準(zhǔn)備進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡或酶活性測(cè)定的樣品池進(jìn)行精確定量時(shí)，Qubit熒光計(jì)配備專(zhuān)用的Qubit蛋白定量檢測(cè)試劑盒。其預(yù)先優(yōu)化的檢測(cè)方案可適應(yīng)十二烷基、二硫蘇糖醇等常用裂解緩沖液的干擾，動(dòng)態(tài)范圍可滿(mǎn)足12.5μg/mL至5mg/mL（常規(guī)定量），甚至更高濃度的需求。這可以確保SDS-PAGE凝膠各泳道蛋白上樣量均一，提高免疫印跡靶標(biāo)條帶信號(hào)的可比性與分析結(jié)論的說(shuō)服力。

    活細(xì)胞與細(xì)胞治療產(chǎn)品開(kāi)發(fā)

    結(jié)合Qubit的細(xì)胞活性試劑盒（如ReadyCountGreen/Red染料），在細(xì)胞治療和CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)等前沿研發(fā)中，Qubit的雙波長(zhǎng)熒光檢測(cè)可實(shí)現(xiàn)非同尋常的混合細(xì)胞群活/死細(xì)胞區(qū)分，克服了傳統(tǒng)臺(tái)盼藍(lán)法對(duì)PBMC等小細(xì)胞判讀困難的局限。

    Qubit熒光計(jì)與紫外分光光度計(jì)的互補(bǔ)關(guān)系

    在分光光度測(cè)量領(lǐng)域，Qubit熒光計(jì)與紫外分光光度計(jì)（如NanoDropOne）在實(shí)驗(yàn)室定量工作中各自具備不可替代的價(jià)值，Qubit的長(zhǎng)處在于特異性、準(zhǔn)確度和低豐度靶標(biāo)的精確定量；紫外分光法則在批次樣品純度（A260/A280、A260/A230比值）快速篩查以及獲取初步濃度估算（尤其高濃度純化產(chǎn)物）等方面具有成本以及時(shí)間優(yōu)勢(shì)。建議的用戶(hù)工作流程往往是：進(jìn)入NGS流程或蛋白結(jié)構(gòu)分析之前，先將樣品通過(guò)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行快速初步篩查，確定大致濃度和污染可能性；隨后對(duì)最終上機(jī)測(cè)序或轉(zhuǎn)染級(jí)樣本用Qubit執(zhí)行最后一次精準(zhǔn)濃度定量，以獲得更全面且可靠的樣品前處理質(zhì)控報(bào)告。

五、選型參考：Qubit4.0與3.0的差異化選擇

    在選型決策框架上，Qubit4.0與Qubit3.0的核心定量原理一致，均依賴(lài)高特異性熒光染料對(duì)核酸或蛋白質(zhì)靶標(biāo)的結(jié)合。由于技術(shù)上保留了相同的光學(xué)模塊與配套試劑體系，用戶(hù)可依據(jù)原始實(shí)驗(yàn)預(yù)算、量產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)室實(shí)際配置進(jìn)行端到端的銜接。若需要便于遠(yuǎn)程及無(wú)線(xiàn)化數(shù)據(jù)管理功能（WiFi導(dǎo)出及云端存儲(chǔ)），推薦優(yōu)選搭載了云連接組件的Qubit4.0；若僅需開(kāi)展常規(guī)快速定量檢測(cè)且實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)設(shè)施已經(jīng)成熟并支持有線(xiàn)連接，Qubit3.0以同樣的檢測(cè)精度和較少的成本投入，適配基礎(chǔ)科研型的小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室。

總結(jié)

    綜上所述，Qubit熒光計(jì)（Qubit4.0與Qubit3.0）憑借其熒光染料特異性結(jié)合原理、低至10pg/μL的高靈敏度以及微量樣品消耗等特點(diǎn)，為各類(lèi)基因組學(xué)、蛋白組學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)提供了精準(zhǔn)可靠的定量保障。無(wú)論是NGS文庫(kù)構(gòu)建前的精準(zhǔn)定量、RNA完整性快速評(píng)估，還是蛋白質(zhì)分析的濃度校準(zhǔn)，Qubit均能提供可信賴(lài)的數(shù)據(jù)支持。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的通量需求、數(shù)據(jù)管理方式和預(yù)算條件選擇合適的型號(hào)，并遵循規(guī)范的試劑存儲(chǔ)與操作流程，將有助于提升樣品質(zhì)控環(huán)節(jié)的效率與下游實(shí)驗(yàn)的成功率。